淺析ELISA試劑盒中陰性本底的形成原因

更新時(shí)間：2021-11-05

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　　今天我們就談ELISA中陰性本底的形成原因。酶聯(lián)固相免疫實(shí)驗(yàn)中，尤其在簡(jiǎn)介ELISA法中，經(jīng)常會(huì)碰到陰性本底的問(wèn)題。主要是本底過(guò)高和不同標(biāo)本的本底值差異較大。本底或稱(chēng)背景，是ELISA中的非特異性顯色。底物未經(jīng)過(guò)酶作用而呈現(xiàn)的顏色稱(chēng)為空白。底物液如配制不當(dāng)會(huì)出現(xiàn)一定的空白值。這個(gè)空白值只要不太高(A<0.05)，可從個(gè)測(cè)定值中減除，并不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。這里研究的是不含待測(cè)抗原或抗體的陰性標(biāo)本在ELISA中出現(xiàn)的本底。從理論上講，只有陽(yáng)性標(biāo)本z終才能引出顯色反應(yīng)，在以下情況。

　　ELISA試劑盒在酶免疫測(cè)定中，ELISA的特點(diǎn)是利用固相載體作為分離游離和結(jié)合的酶結(jié)合物的手段。固相載體與吸附在其上的抗原會(huì)抗體形成固相抗原或固相抗體，即免疫吸附劑。通常所用的固相載體聚苯乙烯其表面主要是疏水基團(tuán)，通過(guò)疏水鍵與蛋白質(zhì)結(jié)合。之中吸附式物理性的非特異性吸附，雖然蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等對(duì)吸附的量有一定的影響，但總的來(lái)說(shuō)各種蛋白質(zhì)均能吸附在聚苯乙烯載體的表面。因此除在包被時(shí)有目的地使抗原或抗體吸附在載體上，在ELISA各個(gè)步驟中均有可能發(fā)生干擾物質(zhì)的吸附，使z終產(chǎn)生與受檢抗原-抗體反應(yīng)無(wú)關(guān)的顯色，這是形成本底的主要原因。

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